DILUIDORES E DILUIÇÃO SEMINAL

I)I - Introdução

Diluição - aumentar o volume e fracionar

Sêmen pode ser trabalhado de três maneiras:

1)Diluir – fracionar – inseminar na hora

2)Diluir – fracionar – resfriar (6-12 hs , suínos até 6 dias)

3)Diluir – fracionar – congelar (anos)

II- Requisitos dos diluidores

vNão ser tóxico

vMesma osmolaridade do plasma seminal

vpH igual ao sêmen

vBaixo custo

vPreparo simples

Os diluidores podem ser:

vLíquidos orgânicos

•plasma seminal ovinos

•Soro sangüíneo inativado pelo calor (1h - 60°C)

vLeite esterilizado (desnatado e em pó)

vClara de ovo – (aumentar volume sêmen de galo)

vSoluções preparadas

•Soro fisiológico (NaCl 8g/l) – inseminação imediatamente

Diluição com soro – Rum. e Coelhos – 1:30

Equi e Suínos – 1: 4

III – Requisitos dos conservantes

Conservar (horas, dias, anos)

Não pode ser tóxico

Mesmo pH

Mesma osmolaridade

Conter nutrientes

Conter Protetores de membrana (choque térmico)

Baixo custo

Preparo simples

Manter a célula com metabolismo baixo em temperaturas 5°C, 15°C e –196°C.

IV – Tipos de Conservantes

a) Gema de ovo – nutrição (glicose), proteção de membrana (lecitina) acima de 0ºC

b) Citrato de sódio – tampão – pH

Em congelamento – equilíbrio osmótico – evita rompimento de células

age desidratando um pouco as células

c) Leite – Proteção de membrana acima de 0°C

d) Glicerol – Mais usado – mais barato – boa ação. Protege as membranas abaixo de 0°C – desidratação.

e) DMSO – semelhante ao glicerol –desidrata células em temperaturas negativas.

f) Etilenoglicol – Protege as membranas em T°C negativas – utilizado em último caso.

g) Glicídios – sacarose, lactose e rafinose – equilíbrio osmótico, impedem o ingresso do glicerol na células ( é tóxico em temp. negativas)

h) Glicose e frutose

i) TRIS eTES – tampão eletrtolítico

j) OEP – equinos e suínos – detergente da camada gelatinosa.

k) EDTA – evita aglutinação espermática

l) ATB – estreptomicina e penicilina -

Cálculo de volume de diluidor

Ex: Bovinos

V= 7ml

MRP= 80%

Conc= 1x109 sptz/ml

1 ) Nº de SPTZ totais - 7x1x109= 7x 109 sptz

2) Nº SPTZ viáveis – 80% 7x 109 = 5,6x109

Após o descongelamento – morte 50% - 50% de 5,6x109 = 2,8 x 109 .

3) Dose inseminante – Bov – 20.000.000 Nº de doses = 2,8 x 109/2x107 = 140

4) Volume da palheta – 0,5 ml

Volume total de sêmen = 0,5x140(volume total) = 70 ml.

Se utilizamos 7 ml de sêmen, 63 ml são de diluidor

DILUIDORES E DILUIÇÃO SEMINAL

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