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Congelação
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CONGELAÇÃO DO SEMEN

Modificações impostas pela congelação

Transformação -líquido -sólido

Cristalização -O°C e -15°C até -60°C

Evitar congelação muito rápida ou muito lenta

CURVA DE CONGELA CÃO

 

 

 

 

ETAPAS DA CONGELAÇÃO

1 -Colheita do sêmen

2 -Análise do Sêmen

3 -Diluição

4 -Resfriamento

5 -Glicerolização

6 -Equilíbrio

7 -Identificação

8 -Envasamento

9 .Congelação

RESFRIAMENTO

Diminuição da temperatura -37°C -5°C (1,5 -2,0 hs)

Utilizar balcão refrigerado ou cuba de gelo na geladeira  

GLICEROLIZAÇÃO

Adição de glicerol- fracionada (3 partes -intervalos 10-15 min)

Auxilia na diminuição da destruição celular

MODOS DE RESFRIAMENTO/GLICROLIZACÃO

1 Etapa -One Step

37°C -sêmen + diluidor com glicerol

2 Etapas -Two steps

Fração A -37°C -sêmen + 1/2 vol de diluidor si glicerol

Fração B -5°C -1/2 volume do diluidor com glicerol

Ex: Volume de sêmen = 6ml

Diluidor = 100ml

Fração A =  6 + 50 ml dilui dor

Fração B = 43 ml diluidor + 7 ml glicerol = 50 ml

Após a diluição F A -análise sêmen (MRP 37°C entre lâmina e Lamínula)

Sêmen + diluidor -beker com água a 37°C -geladeira -5°C (resfriamento)

IDENTIFICAÇÃO

Durante a fase de resfriamento

escrita -Nome, data da colheita, n° de partida etc.

carimbo -data colheita! nome e número do animal, nº partida.

Levar a palhetas para balcão de resfriamento -evitar choque térmico

ENVASAMENTO

Manual ou mecânico

Ampolas de vidro -início -fechadas ao fogo e estocadas na mistura álcool + gelo seco (-79°C)

Pellets -gelo seco

Palhetas -0,25ml ou 0,5 ml -de plástico fechadas com álcool polivinílico ou calor.

Macrotubos -Equinos -4ml

 

MÉTODO DE CONGELAÇÃO NOS DIFERENTES TIPOS DE ENVASE

PELLETS - Deposição de sêmen (0,3ml) na superficie do gelo seco furado com crivo -5min, -Transfere para o nitrogênio líquido.

Descongelação -solução de NaCI, citrato de sódio, leite.

VANTAGEM -baixo custo

DESVANTAGEM -identificação deficiente- sanidade questionável, perda de sptz na manipulação, rediluição, sofre modificações rápidas de temperatura devido à grande superfície de exposição.

EM PALHETAS

VERTICAL -botijão pequeno -introdução de palhetas em suportes - ficam imersas em 1 cm de Nitrogênio líquido -3 mino

Após esse período -imersão total no Nitrogênio.

DESVANTAGEM -congelação desigual

HORIZONTAL -Caixa grande de isopor -3 I de Nitrogênio líquido (4cm) -suporte com palhetas deitadas a 3-4 cm do nitrogênio -10-15 mino Após esse período imersão total no Nitrogênio.

VANTAGEM -congelação homogênea

DESCONGELACÃO

Descongelar as palhetas -viabilidade do sêmen

Banho -Maria 37°C -25-30 seg.

Falhas na descongelação -Descongelação lenta -pode haver

recristalização -injúrias ao espermatozóide -exposição a concentrações de solutos prejudiciais ao espermatozóide.

Descongelação a temperatura ambiente -Na mão ou no bolso do inseminador -pode matar os espermatozóides

Descongelação na vagina -mata os espermatozóide

Descongelação em macrotubos -40°C por 1 min

TESTE DE TERMO RESISTENCIA

Lento -38°C por 5 horas

Rápido -46°C por 1/2 hora

Modificado -45°C -por 1 hora

Verificar o MRP e % de acrossomos íntegros

Bovinos após a descongelação -MRP > 30%

Eqüinos

TTR -37°C por 30 mino

Vigor -3 ou mais

Número de espermatozóide viáveis> 2x 108 por dose. MRP> 30%

 

 

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Última modificação: 18 maio, 2005